Смотр шотландских войск в Холируде, иллюстрация из "L'illustration, Journal Universel", 1860 г… Париж
В Холируде Мария Стюарт вступила в брак со своим двоюродным братом Генрихом Сюартом, графом Дарили. Венчание состоялось 29 июля 1565 года ранним утром в дворцовой часовне. Говорили, что только перед самой церемонией по настоянию избранника королева решилась сменить белый траур (по своему французскому мужу) на многоцветные свадебные одеяния. Супруг стал также причиной одного из самых драматических моментов в жизни Марии Стюарт и самых ярких эмоций, связанных с Холирудом. Шотландская королева, разочарованная поведением своего явно эмоционально незрелого мужа, сблизилась, как говорят, с неким Давидом Риччо. Прибывший на Британские острова в 1561 году в свите савойского посла итальянец очаровал Марию Стюарт. Несмотря на низкое происхождение и отсутствие особой красоты, он стал фаворитом королевы, важным участником дворцовых интриг. Назначенный королевским секретарем, он вызывал зависть у многих шотландских вельмож. Им казалось, что королева удаляет их от влияния на государственные дела. Они организовали заговор против Риччо и втянули в него болезненно ревнивого Дарили. Решено было убить итальянца, причем в присутствии королевы, как бы застав любовников in flagranti (лат. на месте преступления). Драматическое событие разыгралось вечером 9 марта 1566 года. Королева в тот день ужинала в небольшой комнате рядом со своей спальней в обществе самых доверенных мужчин: одним из семерых присутствовавших был и Риччо.
Тем временем более ста вооруженных людей около семи часов вечера окружили замок. Группа заговорщиков во главе с Дарили вошла во дворец. В комнату, где ужинали гости королевы, вошел сначала муж Марии, которого она встретила с удивлением и нескрываемым холодом. За колеблющимся Дарили в покои ворвались и другие заговорщики во главе с лордом Патриком Рутвеном. Он потребовал, чтобы Риччо покинул покои. Королевский секретарь, понимая, что ему грозит, бросился к своей покровительнице, выкрикивая по-итальянски: "Справедливость!" Мария, будучи беременной, все-таки пыталась спасти его. Заговорщики, однако, оттащили итальянца от королевы, а один из них нанес ему удар кинжалом, за ним последовали остальные. Королевский секретарь получил целых 56 ударов, а его кровь обрызгала платье королевы. Когда она пыталась спасать Риччо, один из нападавших приставил к ее груди пистолет.
После убийства королева была заперта в собственной спальне. Но она не потеряла самообладания. Двумя днями позже под предлогом родовых схваток она заставила мужа помочь ей бежать из-под домашнего ареста. Вскоре королеве во главе преданных ей войск удалось вернуться в Эдинбург. Вначале, правда, она остановилась в Эдинбургском замке, ибо трагическая гибель близкого ей человека не позволила ей сразу переступить порог рокового дворца. Когда печальные воспоминания приутихли. Мария Стюарт снова поселилась в Холируде, где в 1576 году она вновь вступила в брак. В тот же самый год, принужденная к отречению от власти, она покинула дворец, чтобы больше никогда туда не вернуться.