Более чувствительным методом качественного определения сивушных масел является следующий:
• 10 мл исследуемой жидкости встряхивают в делительной воронке с 10 мл эфира;
• эфирные извлечения собирают в фарфоровой чашке, и эфир выпаривают;
• к остатку на дне чашки добавляют несколько капель реактива, представляющего собой раствор 0,05 г n-диметиламино-бензальдегида в 10 мл концентрированной серной кислоте.
На наличие сивушных масел указывает темно-красное окрашивание, которое при разбавлении водой становится фиолетовым.
Микроскопическое исследование осадка проводят с целью обнаружения дрожжевых клеток и растительных остатков, которые могут находиться в спиртосодержащих жидкостях домашней выработки. Дрожжи — это семейство одноклеточных грибов, размножающихся почкованием. Клетки дрожжей имеют округлую, яйцевидную или овальную форму шириной 5-7 мкм, длиной 8-11 мкм. Для установления наличия дрожжей исследуемую жидкость фильтруют, осадок с фильтра снимают и помещают в каплю воды на предметное стекло биологического микроскопа (увеличение до 200>×). Таким же образом исследуют частицы растительных остатков.
Более вероятное установление природы неизвестной жидкости возможно по результатам тонкослойной хроматографии. На наличие того или иного вида напитка будет указывать совокупность органических кислот, обнаруженных в неизвестной жидкости. В соках большинства семечковых и косточковых плодов, большинства ягод преобладает яблочная кислота (около 70%). В цитрусовых соках — лимонная кислота.
В виноградных винах преобладают винная и яблочная кислоты, в достаточном количестве присутствует молочная кислота, а лимонная кислота отсутствует. В плодово-ягодных винах винная кислота отсутствует, а лимонная кислота присутствует. Для самогонов, настоянных на плодах и ягодах, характерно наличие органических кислот, аналогичных сокам; превалировать будет яблочная кислота. Для браг в основном характерны молочная и янтарная кислоты.
Тонкослойное хроматографическое исследование спиртосодержащих жидкостей проводится в лабораторных условиях. Порядок проведения хроматографического исследования следующий: около 5 мкл неизвестного спиртного напитка и «свидетелей», в качестве которых обычно используют стандартные смеси органических кислот, наносят на хроматографическую пластину «Silufol». Хроматографирование проводят в следующих системах растворителей:
1) этанол : аммиак : вода (25 : 7,5 : 2,5);
2) толуол : этанол : аммиак (5 : 25 : 5).
Для разделения органических кислот первая система предпочтительнее.
Проявление хроматограмм проводят в анилин-углеводной смеси. Смесь готовят следующим образом: 2 мл анилина растворяют в 20 мл этилового спирта. После этого 2 г любого углевода (фруктозы, глюкозы и т.д.) растворяют в 20 мл дистиллированной воды. Оба полученных раствора сливают вместе и доводят объем до 100 мл бутиловым спиртом. Хроматограмму опрыскивают раствором из пульверизатора. Органические кислоты на хроматограмме распределены в следующей последовательности (для обеих систем) : щавелевая (на линии старта), лимонная, винная, яблочная, янтарная, адипиновая, гликолевая, молочная.