Профессиональная подготовка сестер милосердия включала обучение основным гигиеническим правилам ухода за больными, некоторым лечебным процедурам. Впоследствии круг их обязанностей был существенно расширен. Помимо работы в отделениях общины, сестры милосердия бескорыстно осуществляли уход за больными в малоимущих и бедных семьях.
Женская больница при общине была организована на 25 коек, а начиная с 1868 г. уже насчитывала 58 коек. В 1884 г. была открыта мужская больница на 50 коек.
В разные годы в общине в качестве преподавателей-консультантов работали известные врачи: Η.Φ. Арендт, В.Л. Грубер, Н.Ф. Здекауер, Н.И. Пирогов, Е.В. Павлов, В.Е. Экк, первая женщина-врач Н.П. Суслова. Много для реорганизации системы преподавания в общине сделал П. С. Калабанович, который с 1873 по 1884 г. исполнял обязанности директора общины. Он разработал программу обязательного обучения сестер по уходу за больными. Сестры милосердия общины участвовали во всех крупных войнах второй половины ХIХ – начала XX века.
Деятельность Свято-Троицкой общины сестер милосердия с момента основания и до ее ликвидации в 1917 г. осуществлялась на средства и при активном участии царской семьи Ольденбургских. Принц Александр Петрович Ольденбургский (1844–1932 гг.), являясь с 1881 г. почетным опекуном общины, в 1886 г. создал при ней Пастеровскую прививочную станцию для лечения больных бешенством. Станция содержалась на средства ее основателя, и в декабре 1890 г. на ее базе был создан Институт экспериментальной медицины. Это было первое в России научно-исследовательское учреждение в области медицины и биологии.
В очерке, посвященном 50-летнему юбилею Свято-Троицкой общины, ее вклад в дело медицинского обслуживания оценивался следующими словами: «Труд сестры милосердия составляет фундамент всей деятельности общины. Вот итог деятельности общины: сестры милосердия сутками дежурят в больнице, чередуясь каждые 4–5 дней, участвуют в амбулаторном приеме больных, в значительной части хирургических операций, проводя в основном перевязки; следят за сохранным содержанием инструментария и приготовлением перевязочных материалов, необходимых для антисептических перевязок. На начало 1891 г. при общине было 47 сестер, выполняющих свои обязанности, и 7 человек престарелых, находящихся уже на покое. Из 48 сестер милосердия, находящихся в общине к 1 января 1894 г., 23 сестры по очереди дежурили в мужской и женской больницах, а также ухаживали за больными на дому, 7 сестер – в хирургических отделениях, остальные – в аптеке, "при белье", в операционной, в амбулатории, 2 сестры постоянно находились в Императорском Институте экспериментальной медицины».