Болезни печени (Подымова) - страница 164

Тест–система 1–го поколения (ELISA–1) выявляла антитела к антигену С–100. В дальнейшем были получены новые клоны РНК HCV, продуцирующие другие вирусные антигены для обнаружения соответствующих антител (табл. 6), что привело к появлению 2–го и 3–го поколения ELISA. ELISA–3 широко используется для скрининга доноров, являясь значительно более чувствительной и специфичной по сравнению с тест–системами предыдущих поколений. Важное значение имеет возможность выявления с помощью ELISA–3 антител к NS_>5 –региону, так как до 5% вирусоносителей имеют в крови только данный тип антител, что приводит к ложноотрицательным результатам при использовании первых поколений ELISA.

Таблица 6. Рекомбинантные белки, используемые в тест–системах ELISA и RIBA [Weiland О., 1994].

Использование ELISA–3 дает почти 100% гарантию выявления носителей анти–HCV при скрининге доноров и диагностике вирусных заболеваний печени. Однако в двух случаях антитела могут быть не обнаружены. Во–первых, появление анти–HCV в крови может происходить в срок до 6 мес после инфицирования (в среднем через 12 нед), т.е. в определенный период течения инфекции имеется так называемое серологическое окно. Во–вторых, антитела могут не выявляться у больных, получавших иммуносупрессорную терапию (например, после трансплантации органов). Кроме того, несмотря на высокую специфичность ELISA–3 (99,7%), возможны также ложноположительные результаты. Учитывая это, предложены подтверждающие тесты, такие как рекомбинантный иммуноблоттинг (recombinant immunoblot assay, RIBA) и получивший меньшее распространение анализ синтетических пептидов (Inno–Lia).

При использовании RIBA антигены HCV наносятся раздельно на полоски нитроцеллюлозы и инкубируются с сывороткой больного. При наличии соответствующих антител происходит их визуализация. Тест–система 3–го поколения (RIBA–3), широко распространенная в Европе, содержит синтетические пептиды core–региона, NS_>4, рекомбинантные NS_>3 и NS_>5 (см. табл. 6).

Результаты RIBA считаются положительными при выявлении антител к более чем одному региону HCV.

У большей части RIBA–положительных лиц вирус находится в состоянии репликации, что подтверждается выявлением у 75–80% из них HCV. Отсутствие РНК при наличии анти–HCV может быть обусловлено элиминацией вируса после перенесенной инфекции, уровнем виремии ниже порога чувствительности цепной реакции (polimerase chain reaction, PCR), либо ложноположительным результатом обнаружения антител. Отмечена связь между отсутствием РНК HCV у анти–HCV–положительных больных и отсутствием воспалительных изменений в биоптатах печени, что, по–видимому, является свидетельством элиминации вируса. Однако вирусная РНК может не выявляться у больных после курса противовирусной терапии; в таких случаях не исключено ее наличие в подпороговых титрах или персистенция вируса в тканях, делающая его недоступным для выявления. Следовательно, лиц, позитивных по анти–HCV, даже при отсутствии признаков виремии, необходимо рассматривать как потенциально опасных в плане заражения HCV.