Тем не менее, спустя два месяца после развода великий князь вторично женился 21 января 1526 г. на Елене Васильевне Глинской. Елена была дочерью литовского князя Василия Львовича Глинского, выехавшего в Москву из Литвы в 1508 г. Но до рождения наследника прошло еще долгих четыре года. Василию III был уже 51 год, когда, наконец, 25 августа 1530 г. родился долгожданный ребенок, которого нарекли Иваном и которому суждено было навсегда остаться в истории под именем Ивана Грозного.
Спустя два года, в 1532 г., в семье великого князя родился еще один мальчик, которого назвали Юрием. От рождения Юрий был недоразвитым ребенком и, по словам современников, «без ума и без памяти, и бессловесен».
Вскоре после рождения второго сына, 3 декабря 1533 г, умер великий князь Василий III. Скончался Василий Иванович от злокачественного нарыва, успев перед смертью постричься в монахи под именем Варлаама. Трехлетний Иван, таким образом, становился государем всея Руси под присмотром своей матери и при попечительстве опекунского совета. Предсмертным распоряжением Василия III Елене Васильевне было поручено управление государством до возмужания старшего сына Ивана, назначенного великим князем. Известия летописей об этом не отличаются точностью юридической формулировки, но правительственное значение Елены Васильевны явствует из того, что бояре обязывались приходить к ней с докладами. Поэтому время до ее смерти в 1538 г. можно считать временем правления Елены Глинской.
При Елене Глинской, в 1535 г., была проведена монетная реформа, установившая единую монету по всей территории государства на основе серебряной Новгород-ки-копейки, на которой чеканился всадник с копьем. Укреплению государственного единства в этот период способствовала также фактическая ликвидация двух удельных княжеств — Дмитровского в 1534 г. и Старицкого в 1537 г. Так, через несколько дней по кончине Василия по приказанию Елены был схвачен старший из братьев покойного, Юрий Дмитровский, по обвинению в крамоле и посажен в тюрьму. Младший брат Андрей не был заподозрен в соумышленничестве с Юрием и спокойно жил в Москве до сорочин по великому князю Василию. Собравшись уезжать к себе, в Старицкий удел, Андрей стал припрашивать городов к своей вотчине; в городах ему отказали, а дали вещи — шубы, кубки, коней. Андрей уехал недовольный. Нашлись люди, которые об этом передали Елене, а Андрею сообщили, что его хотят схватить. Приезд Андрея в Москву для личного объяснения с правительницей не положил конца взаимным недоразумениям. В Москву доносили, что Андрей собирается бежать. Елена послала звать князя Старицкого в Москву на совет о войне казанской в 1537 году. Три раза приглашали его в Москву, но он не ехал, отговариваясь болезнью. Тогда было снаряжено в Старицу посольство из духовных особ, и, вместе с тем, было двинуто сильное войско, чтобы отрезать путь к литовской границе. Узнав об этом, Андрей направился в Новгородскую область, где ему удалось возмутить многих помещиков. Настигнутый великокняжеским войском под начальством любимца Елены князя Овчины-Телепнева-Оболенского, Андрей не решился вступить в битву и согласился приехать в Москву, понадеявшись на обещание Оболенского, что там не сделают с ним ничего худого. Елена, однако, сделала Оболенскому строгий выговор, зачем без ее приказания дал клятву князю. Андрей был заключен в тюрьму, где и умер через несколько месяцев в 1537 г. Его жена Ефросиния и сын Владимир также были посажены в тюрьму.