■ α–фетопротеин при гепатоме.
Маркеры вирусов гепатита.
Определение маркеров вирусов гепатита относится к важнейшим иммунологическим исследованиям. Они прежде всего помогают установить этиологию острых и хронических заболеваний печени, а также персистенцию вируса у здоровых людей и перенесенную в прошлом вирусную инфекцию. Подробно вопрос о клиническом значении выявления маркеров вируса гепатита освещен в главах 5 и 12.
Для выявления маркеров гепатитов наибольшее распространение получили методы радиоиммунного и иммуноферментного анализа. Ведущее место при этом имеет иммуноферментный анализ, что обусловлено его высокой чувствительностью, возможностью проведения массовых обследований и отсутствием ограничений, связанных с работой с радиоактивной меткой.
Характеристика различных методов изложена в книге М.С. Балаяна, М.И. Михайлова (1999).
Иммуноферментный анализ (ИФА) – метод, основанный на определении комплекса антиген – антитело за счет введения в один из компонентов реакции ферментативной метки. Основой проведения любого варианта ИФА служит определение продуктов ферментативных реакций при исследовании изучаемых образцов в сравнении с положительными и отрицательными контролями.
Высокая чувствительность ИФА, возможность использовать минимальные объемы исследуемого материала, простота и возможность автоматизации всех этапов проведения реакции определили широкое применение ее в диагностике вирусных гепатитов.
Диагностические наборы для ИФА, предназначенные для выявления серологических маркеров А, В, С, D и Е гепатитов, выпускаются различными предприятиями и фирмами в России и за рубежом.
Радиоиммунный анализ (РИА) используется для выявления антигенов и антител на основании определения комплекса антиген – антитело за счет введения в один из компонентов реакции радиоактивной метки с последующей ее детекцией. При выявлении антигенов и антител вирусных гепатитов применяется твердофазный вариант иммунохимического анализа.
РИА обладает высокой чувствительностью, позволяет получать ответы в цифровом выражении.
Диагностические наборы для выявления различных антигенов вирусов и антител к ним выпускаются фирмой «Изотоп» (Ташкент) и некоторыми зарубежными фирмами («АВВОТТ» и др.).
Важным вопросом, возникающим при проведении ИФА и РИА, является необходимость подтверждения специфичности результатов. Для подтверждения положительных результатов при выявлении HBsAg применяется подтверждающий конфирмационный тест.
Принцип этого теста заключается в предварительной нейтрализации HBsAg, аттестованной анти–HBs–сывороткой, после чего HBsAg перестает выявляться в применяемом тесте его детекции.