Для подтверждения позитивного результата выявления антител к вирусу гепатита С при помощи тест–систем фирмы «Ortho» используется RIBA–тест (см. главу 5, диагностика гепатита С).
Цепная реакция полимеразы (polymerase chain reaction, PCR) – широко известный метод амплификации ДНК и РНК; это новый диагностический прием, позволяющий определять вирусные нуклеиновые кислоты или их фрагменты с высокой степенью разрешения, разработан K.B.Mullis в 1985 г. В основе метода лежит многоцикловой процесс, напоминающий естественную репликацию нуклеиновой кислоты. Каждый цикл состоит из трех последовательных этапов. Первый этап состоит в денатурации искомой нуклеиновой кислоты. После этого нуклеиновая кислота присутствует в растворе в виде отдельных цепей. Если искомой нуклеиновой кислотой является РНК, то она предварительно переводится в форму к ДНК путем обратной транскрипции. На втором этапе к определенному участку каждой из противоположных цепей присоединяются так называемые праймеры. На завершающем третьем этапе происходит синтез новых цепей – амплификация нуклеиновой кислоты – при участии фермента ДНК–полимеразы. Метод PCR отличается высокой чувствительностью и специфичностью в обнаружении нуклеиновых кислот вирусов; он нашел применение в работе со всеми известными вирусами гепатитов человека. В последние годы предложены другие альтернативные PCR–методы амплификации ДНК и РНК [Федоров Н.А., 1996]: лигазная цепная реакция, циклическая зондовая технология.
Определение печеночных аутоантител методом иммунофлюоресценции.
Важным признаком нарушенного состояния иммунитета при хронических активных заболеваниях печени служит появление в крови аутоантител, реагирующих с различными антигенными компонентами клеток и тканей. Метод иммунофлюоресценции позволяет локализовать циркулирующие антитела на тканевых срезах различных органов, что значительно увеличило клиническое значение этих серологических показателей.
Непрямая иммунофлюоресценция заключается в том, что на срезы тканей, содержащие соответствующие антигены, наносят сыворотку крови больного, в которой могут содержаться антитела к этому антигену. После отмывания несвязывающихся белков наносят меченную флюоресцеин–изотиоционатом антисыворотку против человеческого γ–глобулина. Если в сыворотке больного содержатся антитела к соответствующему тканевому антигену, то меченые антитела связываются с антителами сыворотки больного, появляется специфическое свечение.
Иммунологическими маркерами хронических активных заболеваний печени являются: